在国家自然科学基金（81470002 、 81670020）支持下，华中科技大学同济医学院附属同济医院呼吸与危重症科谢敏教授团队「血浆miR-199a-5p在中性粒细胞型哮喘患者中表达增高并与肺功能呈负相关」于2018年2月12日被PLOS ONE杂志接收。硕士研究生黄雅丽、张圣丁为该文共同第一作者。

哮喘是一种异质性疾病，可以根据临床特征（发病年龄、严重程度等）、诱发因素（运动和病毒感染等）、炎症反应类型（嗜酸性粒细胞型、中性粒细胞型、混合细胞型及寡细胞型）等分为不同表型。其中，中性粒细胞型哮喘患者更倾向于对糖皮质激素的反应不佳并发展为有持续症状的肺功能受损。

Micro- RNAs（miRNAs）是一种在进化过程中高度保守的、单链、非编码RNA。miRNAs可以直接与目的mRNA结合导致mRNA的降解或者抑制其蛋白质的翻译；miRNA还可以通过调节基因甲基化以及作用于转录因子，从而间接影响基因的表达。miRNAs在细胞的增殖、分化以及凋亡中起着重要的调节作用。miRNAs的一个独有特性是能够分泌至血浆、支气管肺泡腔和体液中并稳定存在。最近一些研究发现血浆miRNAs有望成为各种疾病（包括哮喘）灵敏的无创性的生物标志物。

本项研究纳入了15例健康对照者与35例支气管哮喘患者，受试者招募于华中科技大学及华中科技大学同济医学院附属同济医院（2015~2016）。该项研究检测了受试者血浆及诱导痰miR-199a-5p的表达水平及并对miR-199a-5p的来源、功能进行了探讨。

重要科学研究发现

1、血浆miRNA-199a-5p表达水平在中性粒细胞型哮喘患者与健康对照组相比明显升高（p＝0.014），而嗜酸性粒细胞型哮喘患者和健康受试者之间无显著性差异。哮喘患者血浆miRNA-199a-5p表达水平与诱导痰的呈正相关（Spearman的秩相关系数，r=0.511，p=0.021）。

2、观察健康对照者外周血淋巴细胞、中性粒细胞、巨噬细胞及人上皮细胞系（BEAS-2B）在LPS刺激24h后miRNA-199a-5p表达水平。结果表明只有中性粒细胞在LPS刺激后miRNA-199a-5p表达水平明显升高（p＜0.01），其他各组均无明显变化。

3、哮喘患者血浆miR-199a-5p表达水平与血清IgE、 FEV1、FEV、PEF均负相关（spearman相关系数分别为：-0.465，p=0.010； -0.377，p=0.026；-0.419，p=0.012； -0.392，p=0.024）。多元相关分析也显示哮喘患者血浆miR-199a-5p水平与FEV1负相关（Adjusted R2=0.164, p（model）= 0.015；β= -0.439，p=0.015）。

4、通过TargetScan，miRanda及PicTar miRNA靶基因预测软件对miR-199a-5p靶基因进行预测及分析。结果发现WNT，mTOR and hippo 信号通路是miR-199a-5p参与的主要通路，其中WNT通路在miR-199a-5p调节平滑肌的肥大增生中起到了重要作用。通过在气道平滑肌细胞中转染miR-199a-5p mimic（模拟物）探讨miR-199a-5p的功能。转染组Wnt2及Wnt4蛋白水平较对照组明显下降,与此同时，转染组c-myc蛋白水平较对照组表达明显下降。相反，转染组Sm-MHC的mRNA表达水平较对照组明显升高。miR-199a-5p可能在调节气道平滑肌细胞的肥大及收缩中起到了一定作用。

研究结果表明

血浆miR-199a-5p在中性粒细胞型哮喘患者中表达明显升高并可能通过调节炎症反应及肺功能参与哮喘发生、发展。血浆miR-199a-5p有望成为中性粒细胞型哮喘的生物标志物，其临床价值及在哮喘发病机制中的具体作用值得进一步探讨。

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